在微生物檢測中常會遇到以下問題，可用以下解決方案

為什么劃不出單個菌落？

（1）平板上有過多的水分；

（2）在劃線時沒有反復灼燒接種環；

（3）多區劃線，三區或四區劃線，越是稀釋到4區，間距要越寬。

培養基配制時應注意的問題

①嚴格控制滅菌溫度，需要按照要求進行滅菌操作。如果培養基的含糖量較高，那么滅菌溫度就不能太高，否則就會使糖分焦化，從而影響培養基的質量。

②不能反復融化瓊脂培養基，這會對培養基中的營養成分產生破壞。

③不能對培養基進行反復滅菌，這同樣也會對營養成分產生破壞作用。 

④在對瓊脂培養基進行滅菌后需要將其充分搖勻。

⑤需要將培養基完全溶解才能分裝培養基。

培養基的保存

（1）平板：大多數平板如VRBA、DC、尿素酶生化管、顯色系列等要避光低溫保存。

（2）干粉培養基：避光干燥，結塊后不能使用。

（3）亞碲酸鉀卵黃增菌液、50%卵黃乳液等：冷凍保存，使用時，要常溫解凍，不能使用水浴加熱。

（4）抗生素類：冷藏保存，溫度過高會導致靈敏度的下降。

（5）兔血漿：冷藏保存少量的紅色不會影響結果。

觀察時間的掌握

按SN、GB等標準或培養基的使用說明所述時間進行觀察，時間過短或時間過長，單菌落的特征都不會很明顯。如單增李斯特氏菌顯色培養基，時間短單菌落看不到卵磷脂環，時間長綿羊李氏菌也會產生沉淀環。OXA、PALCAM的觀察也如此，時間過長，李氏菌使整個平板成黑色，不利于觀察單個菌落。霉菌要3天后要及時觀察計數，防止時間長成一片。

添加劑的添加

（1）溫度的掌握:卵黃和抗生素類添加的溫度都不應太高。

（2）定量: 過多會抑制一些目標菌，太少又導致雜菌的過度生長。

培養溫度的掌握

（1）真菌類：25-28℃培養

（2）細菌類：李氏菌在增菌和生化中要求培養溫度在30℃左右。

（3）其他一般在36℃左右

常用的接種方法

穿刺接種、傾注接種、涂布接種、劃線接種。

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