雖然自動化儀器已經開始占領了微生物檢驗的市場，但是其成本是十分的高，特別是基層醫院很難用的起，所以我們不要忘了基礎的東西，從基礎一步一步去掌握我們的任何一個實驗室項目。不要因為有儀器直接給出相對正確的結果而忽略了您應該知道的基礎知識。

文字是枯燥的，微生物也是枯燥的，忍受文字上帶來的不悅，耐心的和我一起學習去，也許就會帶來精神上的升華和臨床技術水平的提高。

第三節：常用的微生物培養基

3.1培養基的組成成分

3.1.1營養物質

細菌需要的基礎營養物質應含有氮源、碳源、無機鹽類和生長因子等，常用的營養物質如下：

蛋白胨提供氮源。是動物或植物蛋白質經酶或酸堿分解而成。含胨、多肽和多種氨基酸，為大多數細菌生長所利用，尤其是含大量色氨酸的胰蛋白胨，更適于測靛基質用的蛋白胨。蛋白胨易溶于水，遇酸不沉淀，不因受高溫而凝固，并對兩性電解質有緩沖作用。但吸水性強，應注意干燥密封保存。

肉浸液是用新鮮牛肉浸泡、煮沸而制成的肉汁。其中含有可溶性含氮浸出物（肌酸、黃嘌呤、腺嘌呤、次黃嘌呤核苷酸、谷氨酸、甘氨酸等）和非含氮浸出物（肝糖、乳酸、琥珀酸、磷酸己糖、脂肪、無機鹽類等）。還有一些生長因子。肉浸液提供氮源和碳源，但肉浸液中所含氮物質過少而不能滿足細菌的需要，因此在制備培養基時應再加入1%～2%的蛋白胨和0.5%氯化鈉。

牛肉膏由肉浸液經長時間加熱濃縮而制成。糖類在加熱過程中被破壞，所以其營養價值低于肉浸液，但因無糖可用作腸道桿菌鑒別培養基的基礎成分。由于使用方便，常用于制備培養基。

糖類、醇類提供碳源和能源。制備培養基所用的糖類、醇類有多種，常用的糖類有單糖（葡萄糖、阿拉伯糖等）、雙糖（乳糖、蔗糖等）和多糖（淀粉、菊糖等）；常用的醇類有甘露醇、衛茅醇等。除葡萄糖、蔗糖主要作為碳源和能源的基本成分外，其他糖類和醇類主要用于鑒定細菌所做的發酵反應。

無機鹽類提供細菌生長的各種元素，如：鉀、鈉、鐵、鎂、鈣、磷、硫等。用于制備培養基的無機鹽類有多種，其中最常用的有氯化鈉和磷酸鹽，前者對維持酶的活性、調節菌體內外的滲透壓非常重要，后者是細菌良好的磷源，并在培養基中具有緩沖作用。

雞蛋和動物血清雖然不是構成培養基的基本成分，但卻是某些細菌生長所必需的營養物質，所以僅用于制備一些特殊的培養基，這些細菌直接從雞蛋和動物血清中獲取營養。如培養結核分枝桿菌的雞蛋培養基和培養白喉桿菌的呂氏血清培養基等。

生長因子是細菌生長所必需的，但需要量很小。在制備培養基時，常在肝浸液、肉浸液、酵母浸液和含血液培養基中加入維生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等生長因子。

3.1.2凝固物質：制備固體培養基時，需要在液體中加入凝固物質。最常用的凝固物質為瓊脂，特殊情況下也可用明膠、卵白蛋白、血清等。無營養作用。

3.1.3抑制劑和指示劑：用于選擇、鑒定及判斷結果。

抑制劑有選擇抑制作用，抑制非檢出菌（非病原菌）的生長，以利于檢出菌（病原菌）的生長。常用的有膽鹽、煌綠、亞硫酸鈉、亞硒酸鈉及一些染料和某些抗生素等。

指示劑：觀察細菌是否利用和分解培養基中的糖、醇類。常用的有酚紅、中性紅、甲基紅、溴甲酚紫、溴麝香草酚藍、中國藍等酸堿指示劑。亞甲藍常用作氧化還原指示劑。

3.2培養基種類

3.2.1基礎培養基：含有基礎生長所需的基本營養成分，最常用的是肉浸液，俗稱肉湯，主要成分含牛肉浸液和蛋白胨?；A培養基廣泛用于細菌的增菌、檢驗，也是制備其他培養基的基礎成分。

3.2.2營養培養基：在基礎培養基中可加入葡萄糖、血液、生長因子等特殊成分，供營養要求較高的細菌和需要特殊生長因子的細菌生長。最常用的是血瓊脂平板、巧克力血平板（如下）等。

3.2.3鑒別培養基：利用細菌分解糖類和蛋白質的能力及其代謝產物的不同，在培養基中加入特定的作用底物和指示劑，觀察細菌生長過程中分解底物所釋放的不同產物，通過指示劑的反應不同來鑒別細菌。如糖發酵管、克氏雙糖鐵瓊脂（KIA）、伊紅-亞甲藍瓊脂和動力-吲哚-尿素（MIU）培養基等。

3.2.4選擇培養基；在培養基中加入抑制劑，去抑制標本中的雜菌生長，有助于所選擇的細菌種類的生長。例如培養腸道致病菌的SS瓊脂，其中的膽鹽能抑制革蘭陽性菌，枸櫞酸鈉和煌綠能抑制大腸埃希菌，因而使致病的沙門菌、志賀菌容易分離到。

3.2.5特殊培養基：包括厭氧培養基和細菌L型培養基等。前者是培養專性厭氧菌的培養基，除含營養成分外，還加入還原劑以降低培養基的氧化還原電勢，如皰肉培養基、巰基乙醇酸鈉培養基等。后者是針對細胞壁缺損的細菌L型，由于胞內滲透壓較高，故培養該菌時必須采用高滲（3%～5%NaCl、10%～20%蔗糖或7%聚乙烯吡咯烷酮等）低瓊脂培養基。

3.3分離培養基的選擇：臨床標本送往細菌實驗室后，應立即接種到適當的分離培養基上。依據衛生部臨床檢驗中心推薦，細菌實驗室應備有如下分離培養基：

3.3.1血平板適于各類細菌的生長，一般細菌檢驗標本的分離，都應接種此平板。

3.3.2巧克力血平板其中含有V和X因子，適于接種疑有嗜血桿菌、奈瑟菌等的標本。

3.3.3中國藍平板或伊紅亞甲藍平板可抑制革蘭陽性細菌，有選擇地促進革蘭陰性細菌生長，是較好的弱選擇性培養基。發酵型革蘭陰性桿菌因分解乳糖能力不同，在此平板上菌落顏色不同，便于鑒別菌種。

3.3.4麥康凱平板具中等強度選擇性，抑菌力略強，有少數革蘭陰性菌不生長。在麥康凱平板上能否生長，是不發酵菌鑒定的一個依據。

3.3.5.SS瓊脂有較強的抑菌力，用于志賀菌和沙門菌的分離。因選擇性過強，可影響檢出率，所以，使用時最好加一種弱選擇平板以配對互補。

3.3.6.堿性瓊脂或TCBS瓊脂用于從糞便中分離霍亂弧菌及其他弧菌。

3.3.7血液增菌培養基用于從血液、骨髓中分離常見病原菌。

3.3.8營養肉湯用于標本及各類細菌的增菌培養。

3.3.9 MH瓊脂平板：用于細菌的抗生素敏感試驗。MH瓊脂平板是WHO推薦的適用于K-B法測定細菌對抗菌藥物敏感性的培養基。對于同種細菌不同藥敏紙片，抑菌環越大，表示抗生素對此細菌抑制能力越強。反之越弱。

3.3.10沙保弱培養基：白色念珠菌的鑒定和培養，將檢材接種于沙保弱瓊脂培養基，攝氏25度孵育3－4天后，即可在培養基表面形成乳白色（偶見淡黃色）類酵母菌落。

3.3.11念珠菌顯色培養基：用于白色念珠菌分離和鑒定。通過顯色來區別不同念珠菌，白色念球菌顯藍綠色，熱帶念珠菌顯藍灰色或鐵藍色，光滑念珠菌顯紫色，克柔假絲酵母顯粉色，其它顯白。3.3.12B群鏈球菌顯色平板：添加了特異性的酶底物，經B群鏈球菌的酶解作用釋放出顯色原從而使細菌呈現出不同的顏色。淡紅色到深紅色是B群鏈球菌。藍色，綠色，無色或被抑制是其他細菌。

 

3.4根據標本來源和可能存在的病原菌，確定選用各種分離培養基

大部分細菌培養的標本—血平板、巧克力平板

糞便標本---EMB、SS、MAC、TCBS

酵母樣真菌培養---念珠菌顯色平板、沙保弱平板

淋病培養標本—淋球菌平板

中段尿---血平板，若做菌落計數時，可聯合血平板、普通營養瓊脂，及或麥康凱（或中國藍）

腦脊液標本---血瓊脂、巧克力瓊脂、麥康凱或中國藍平板、CHROMagar或者沙保羅瓊脂。若懷疑有專性厭氧菌感染時，可增加厭氧培養基。

痰標本--血平板、加萬古霉素的巧克力平板、CHROMagar或含氯霉素的SDA等。

疑白喉--亞碲酸鉀血瓊脂、呂氏血清斜面或雞蛋斜面。

疑為百日咳桿菌--鮑-金(Bordet-Gengou)平板。

疑金葡感染致偽膜性腸炎的糞便標本---疊氮鈉血瓊脂，亦可用選擇性培養基

疑似霍亂弧菌感染的糞便標本----堿性蛋白胨水

懷疑有苛養菌（淋球菌、杜克雷嗜血桿菌等）感染者的尿細菌培養--加種巧克力培養基和TM培養基。

 

信息來源：司南說檢驗微信公眾號